Gene de resistência a carbapenêmicos (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
Nome do produto
Kit de detecção de genes de resistência a carbapenêmicos HWTS-OT045 (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP) (PCR por fluorescência)
Epidemiologia
Os antibióticos carbapenêmicos são antibióticos β-lactâmicos atípicos com o espectro antibacteriano mais amplo e a atividade antibacteriana mais potente. Devido à sua estabilidade frente às β-lactamases e à sua baixa toxicidade, tornaram-se um dos fármacos antibacterianos mais importantes para o tratamento de infecções bacterianas graves. Os carbapenêmicos são altamente estáveis frente às β-lactamases de espectro estendido (ESBLs) mediadas por plasmídeos, aos cromossomos e às cefalosporinases mediadas por plasmídeos (enzimas AmpC).
Canal
| Mistura PCR 1 | Mistura de PCR 2 | |
| FAM | IMP | VIM |
| VIC/HEX | Controle interno | Controle interno |
| CY5 | NDM | KPC |
| ROX | OXA48
| OXA23 |
Parâmetros técnicos
| Armazenar | ≤-18℃ |
| Prazo de validade | 12 meses |
| Tipo de espécime | Escarro, colônias puras, swab retal |
| Ct | ≤36 |
| CV | ≤5,0% |
| LoD | 103UFC/mL |
| Especificidade | a) O kit detecta as referências negativas padronizadas da empresa e os resultados atendem aos requisitos das respectivas referências. b) Os resultados do teste de reatividade cruzada mostram que este kit não apresenta reação cruzada com outros patógenos respiratórios, como Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella oxytoca, Haemophilus influenzae, Acinetobacter junii, Acinetobacter haemolyticus, Legionella pneumophila, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Chlamydia pneumoniae, adenovírus respiratório, Enterococcus ou amostras contendo outros genes de resistência a medicamentos, como CTX, mecA, SME, SHV, TEM, etc. c) Anti-interferência: Mucina, Minociclina, Gentamicina, Clindamicina, Imipenem, Cefoperazona, Meropenem, Cloridrato de Ciprofloxacina, Levofloxacina, Ácido Clavulânico e Roxitromicina foram selecionados para o teste de interferência, e os resultados mostram que as substâncias interferentes mencionadas acima não apresentaram reação de interferência na detecção dos genes de resistência a carbapenêmicos KPC, NDM, OXA48, OXA23, VIM e IMP. |
| Instrumentos aplicáveis | Sistemas de PCR em tempo real Applied Biosystems 7500 Sistemas de PCR em tempo real QuantStudio®5 Sistemas de PCR em tempo real SLAN-96P (Hongshi Medical Technology Co., Ltd.) Sistema de PCR em tempo real LightCycler®480 Sistema de detecção de PCR em tempo real LineGene 9600 Plus (FQD-96A，HangzhouBiotecnologia) Ciclador térmico quantitativo em tempo real MA-6000 (Suzhou Molarray Co., Ltd.) Sistema de PCR em tempo real BioRad CFX96 Sistema de PCR em tempo real BioRad CFX Opus 96 |
Fluxo de trabalho
Opção 1.
Reagente de extração recomendado: Kit Macro & Micro-Test General DNA/RNA (HWTS-301)9-50, HWTS-3019-32, HWTS-3019-48, HWTS-3019-96) (que pode ser usado com o Extrator Automático de Ácidos Nucleicos Macro & Micro-Test (HWTS-3006C, HWTS-3006B)) da Jiangsu Macro & Micro-Test Med-Tech Co., Ltd.. Adicione 200 μL de solução salina normal ao precipitado do talo. As etapas subsequentes devem seguir as instruções de extração, e o volume de eluição recomendado é100 μL.
Opção 2.
Reagente de extração recomendado: Reagente para Extração ou Purificação de Ácidos Nucleicos (YDP302) da Tiangen Biotech (Beijing) Co., Ltd. A extração deve ser iniciada seguindo rigorosamente o passo 2 das instruções de uso (adicione 200 μL de tampão GA ao precipitado do talo e agite até que o talo esteja completamente em suspensão). Utilize água livre de RNase/DNase para a eluição, sendo o volume de eluição recomendado de 100 μL.
Opção 3.
Reagente de extração recomendado: Reagente de Liberação de Amostra Macro & Micro-Test. A amostra de escarro deve ser lavada adicionando-se 1 mL de solução salina normal ao precipitado de talo tratado mencionado anteriormente, centrifugada a 13.000 rpm por 5 minutos e o sobrenadante descartado (reserve 10-20 µL do sobrenadante). Para colônias puras e swabs retais, adicione 50 µL do reagente de liberação de amostra diretamente ao precipitado de talo tratado mencionado anteriormente e as etapas subsequentes de extração devem ser realizadas de acordo com as instruções de uso.
